王朝的分裂。
1554年至1556年間，查理五世逐漸將哈布斯堡帝國和哈布斯堡家族分為一個西班牙的主要支係和一個德奧的分支。
他的所有退位儀式都在布魯塞爾的庫登貝格宮進行。
首先，他在1554年7月25日將西西裡島和那不勒斯的王位（後者是教皇的封地）以及米蘭公國的皇室權力讓給了他的兒子菲利普。
菲利普在1540年和1546年就已經秘密獲得米蘭的封地，但直到1554年，皇帝才公開宣布這一決定。
在退位西西裡島和那不勒斯後，菲利普於10月2日被教皇尤利烏斯三世授予那不勒斯王國，並於11月18日獲得西西裡王國的封地。
最著名的也是唯一一次公開的退位發生在一年後，即1555年10月25日。
當時，查理在荷蘭各省的省議會（重聚於四十年前他在馬克西米利安皇帝麵前獲得解放的偉大大廳）上宣布退位，將這些領土讓給他的兒子菲利普，並表示他打算辭去所有職位，退休到一個修道院。
儀式上，因痛風而飽受折磨的查理五世依靠著他的顧問威廉·無畏的肩膀，流著淚發表了辭職演說
“當我十九歲時……我決心競選皇帝的皇冠，並不是為了增加我的財富，而是為了更積極地致力於德國及我的其他領土的福祉……
希望能夠為基督教民族之間帶來和平，並團結他們的力量以扞衛天主教信仰，抵禦奧斯曼帝國……
我幾乎達到了目標，但法國國王和一些德國諸侯的進攻讓我再次被迫拿起武器。
對我的敵人，我儘力而為，但戰爭的成功在於上帝的手中，祂隨心所欲地賜予勝利或奪走勝利……
我必須承認，我常常誤導自己，無論是因為年輕時的無知，還是因為成年後的驕傲，或是其他人性上的弱點。
然而，我向你們聲明，我從未故意或樂意地行不義之事……
如果這種行為仍然被公正地歸咎於我，我鄭重地向你們保證，我是出於無知，並非出於我的本意。
因此，我懇請在座的各位，以及那些缺席的人，原諒我在這方麵所犯的錯誤。”
他以提及自己的旅行結束了演說十次前往低地國家，九次前往德國，七次前往西班牙，七次前往意大利，四次前往法國，兩次前往英格蘭，以及兩次前往北非。
他的最後一句公開話是“我的一生就是一場漫長的旅程。”
在沒有任何盛大儀式的情況下，查理於1556年完成了他的退位。
1556年1月16日，他將西班牙及其在美洲的西班牙帝國交給了菲利普。
1556年8月27日，他將神聖羅馬帝國皇帝的位子讓給了他的弟弟斐迪南，斐迪南於1531年被選為羅馬國王。
皇帝的繼承在1558年時被法蘭克福集會的選侯們認可，1559年時被教皇認可。
皇帝的退位還標誌著斐迪南在奧地利領土上的法律和實質統治的開始，自15211522年起他便以查理的名義治理這些領土，並自1526年起附屬於匈牙利和波希米亞。
據學者分析，查理決定退位的原因多種多樣
1555年確認的德國宗教分裂；
西班牙財政狀況的惡化，在他統治結束時已經因通貨膨脹而破產；
意大利戰爭的複蘇，法國國王亨利二世的攻擊；
奧斯曼帝國在地中海和中歐的不斷進逼；